Technologia:

PCR emulsyjny jest nowym podejściem w biologii molekularnej służącym do wykrywania kwasów nukleinowych i oceny ilościowej produktu. ddPCR oferuje odmienny sposób absolutnej kwantyfikacji i detekcji rzadkich alleli w stosunku do konwencjonalnej metody PCR w czasie rzeczywistym (real-time PCR, qPCR). Metoda ddPCRoparta jest o emulsyjno-kropelkową technologię, dzięki czemu pojedyncza próbka ulega w czasie rzeczywistym frakcjonowaniu na 20 000 kropli umożliwiając czułą i precyzyjną detekcję obecności w każdej z nich nawet pojedynczej cząsteczki DNA. System sczytuje cząsteczki docelowe (dodatnie) i wszystkie pozostałe (negatywne), w oparciu o które generuje się bezwzględna liczba cząsteczek docelowych w próbce, bez konieczności odniesienia do krzywych standardowych czy genu referencyjnego (w przeciwieństwie do qPCR). Sprawia to, że ddPCR jest znacznie czulszą alternatywą dla klasycznej reakcji qPCR.

Oferta:

Pracownia  oferuje wykonanie doświadczenia na najnowszym systemie QX200^TMDropletDigital^TM PCR przy wykorzystaniu EvaGreen lub sond typu TaqMan lub MolecularBeacons

• Reporter: FAM, VIC lub HEX
• Wygaszacz: BHQ

Aplikacje: - można nazwać: Zastosowanie ddPCR

• detekcja rzadkich mutacji
• absolutna kwantyfikacja ekspresji genów, analiza miRNA
• absolutna kwantyfikacja miana wirusa, detekcja patogenów, analiza pojedynczych komórek
• detekcja rzadkich sekwencji
• absolutna kwantyfikacja bibliotek do sekwencjonowania NGS
• analiza CNV (Copy Number Variations)

Zalety PCR emulsyjnego:

• brak konieczności odniesienia do krzywych standardowych, czy genu referencyjnego
• zwiększona precyzja może być osiągnięta poprzez zwiększenie liczby powtórzeń
• wysoka tolerancja na inhibitory
• zdolność analizy złożonych mieszanin
• wyniki są generowane w postaci liniowej w zależności od liczby obecnych kopii, co ułatwia analizę małych różnic w zmianie fold'u (foldchange)

Usługa krok po kroku:

1. Pomoc w zaplanowaniu eksperymentu.

2. Przeprowadzenie doświadczenia ddPCR.

3. Analiza wyniku.